引言

甘氨酸脱氢酶（Glycine Dehydrogenase, GLDC）是一种线粒体酶，在甘氨酸代谢途径中发挥关键作用。它通过催化甘氨酸的氧化脱羧反应，参与一碳单位的生成及能量代谢，与多种遗传性和获得性疾病密切相关。近年来，随着代谢组学及分子诊断技术的发展，甘氨酸脱氢酶活性及其基因变异的检测在临床诊断、遗传病筛查及基础研究中备受关注。本文系统介绍甘氨酸脱氢酶检测的范围、项目、方法及仪器，以期为相关领域的科研与临床实践提供参考。

检测范围

甘氨酸脱氢酶检测主要应用于以下场景：

• 临床诊断：用于新生儿遗传代谢病筛查，尤其是非酮性高甘氨酸血症（NKH）的早期诊断；
• 肝脏疾病评估：肝脏功能异常时，酶活性变化可反映线粒体损伤程度；
• 科研领域：研究甘氨酸代谢通路与神经退行性疾病、肿瘤的关联性；
• 药物开发：评估药物对甘氨酸代谢的干预效果及潜在毒性。

检测项目

甘氨酸脱氢酶检测的核心项目包括：

• 酶活性测定：通过比色法或荧光法量化酶促反应速率；
• 基因突变分析：针对GLDC基因的测序，识别致病性变异；
• 代谢产物检测：测定血液或脑脊液中甘氨酸浓度及次级代谢物；
• 蛋白质表达水平：利用Western blot或免疫组化评估酶的表达量。

检测方法

1. 酶活性测定法

采用分光光度法，以甘氨酸为底物，在辅酶NAD⁺存在下，检测340 nm处吸光度的变化，计算酶活性单位（U/mg蛋白）。该方法灵敏度高，但需严格控制反应温度及pH值。

2. 基因测序技术

通过Sanger测序或二代测序（NGS）对GLDC基因全外显子进行扩增与序列分析，可检出点突变、缺失/插入等变异类型，结合生物信息学工具预测变异致病性。

3. 代谢物定量分析

应用液相色谱-质谱联用技术（LC-MS/MS）对血浆或脑脊液中的甘氨酸及其衍生物进行定量，结合同位素内标法提高检测准确性。

检测仪器

• 分光光度计：用于酶活性测定，推荐配备温控模块的紫外-可见光谱仪；
• 基因测序仪：如Illumina MiSeq或Thermo Fisher Ion S5系统；
• 质谱仪：Triple Quadrupole质谱仪具有高灵敏度和特异性；
• 电泳与成像系统：Western blot检测需使用SDS-PAGE电泳槽及化学发光成像仪。

质量控制与标准化

检测过程中需严格实施质量控制：

• 使用标准品定期校准仪器，确保线性范围符合要求；
• 设立阴性/阳性对照样本，验证检测体系稳定性；
• 依据CLSI指南进行检测方法的验证与优化。

结论

甘氨酸脱氢酶检测是代谢性疾病诊断与机制研究的重要工具。随着检测技术的进步，多组学联合分析（如整合酶活性、基因突变及代谢物数据）可显著提升诊断效能。未来，人工智能辅助的变异解读及即时检测（POCT）设备的开发，将进一步推动该检测在临床与科研中的应用普及。

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